Gra "Mario Bros" polega na eliminowaniu wypełzających z rur kanalizacyjnych żółwi, raków i much. W miarę, jak przeciwników zostaje mniej, tym szybsi i zwinniejsi się oni stają - utrudniając nam zadanie. Zwalczanie wrogów ułatwia guzik "POW", a w nagrodę za wykonane zadanie otrzymujemy złote monety. Rozgrywka może odbywać się w trybie jednoosobowym (sterujemy Mario) i dwuosobowym (możliwość poruszania się Luigim).