Historia jest potężniejsza niż życie - oraz dwa razy śmieszniejsza - w tym monumentalnym sequelu komediowym, który jest jeszcze zabawniejszy niż jego poprzednik.

Ben Stiller przewodzi doskonałej obsadzie (Amy Adams, Owen Wilson, Hank Azaria i Robin Williams) jako Larry Daley, były strażnik Muzeum Historii Naturalnej, w którym po zmroku eksponaty budzą się do życia. Tym razem nocni przyjaciele Larry'ego zostają przeniesieni do zbiorów Instytutu Smithsona, gdzie wciągają go w prześmieszną, pełnowymiarową wojnę przeciwko zrzędliwemu, egipskiemu Faraonowi, który planuje nie tylko przejąć kontrolę nad muzeum... ale również zdobyć władzę nad światem.

Gdy zapada noc, przewodnicy kończą pracę i idą do domu, a szkolne wycieczki kończą zwiedzanie, w waszyngtońskim Instytucie Smithsonian dzieje się coś niezwykłego. Nocny strażnik Larry Daley (w tej roli Ben Stiller) przeżyje największą przygodę swego życia. W drugiej części „Nocy w muzeum" Larry stoczy epicką walkę, która mogła się odbyć tylko w największym kompleksie muzealnym na świecie. Daley będzie musiał stanąć w obronie przyjaciół-eksponatów.