Mario jest głównym bohaterem serii gier o tej samej nazwie. Wraz ze swoim bratem Luigim zostaje podrzucony przez bociana na wyspę Yoshi. Jego brat zostaje porwany a Mario musi wyruszyć na swoją pierwszą misję ratunkową. Informacje co do prawdziwego pochodzenia rodzeństwa są sprzeczne i niewiele o nim wiadomo. Mario ma najprawdopodobniej 25 lat i zamieszkiwał kiedyś na Brooklynie, gdzie pracował jako hydraulik. Nosi charakterystyczną czapkę z literą "M", wąs i niebieskie ogrodniczki.
Jest dobrym, optymistycznie nastawionym do życia człowiekiem. Nie brakuje mu odwagi, nie boi się stojących przed nim wyzwań. Uwielbia uczestniczyć w zawodach sportowych. Nie szydzi z przeciwników, potrafi docenić zarówno ich wygraną, jak i pocieszyć po porażce. Kocha również zwierzęta, szczególnie te nietypowe. Lubi muzykę, w szczególności operę i europop. Troszczy się o swojego brata. Jest o wiele bardziej otwarty niż introwertyczny Luigi. Działa szybciej i agresywniej niż młodszy brat.
Mario jest zafiksowany na punkcie jedzenia. Nie przestaje być głodny i fascynuje go włoska kuchnia. Uwielbia ciasta pieczone przez księżniczkę Peach. W trakcie snu często śni o pizzy i makaronach. Pomimo upomnień ze strony przyjaciół, pozostaje wielkim łasuchem i nie żałuje sobie niczego. Rzadko się odzywa, a jeśli już to posługuje się angielskim z silnym włoskim akcentem. Często mówi o sobie w trzeciej osobie.
Mario jest zakochany z wzajemnością w księżniczce Peach. Wielokrotnie ratował ją z opresji. Doskonale dogadują się w grach zespołowych. Przyjaźnią się od dzieciństwa. W pewnym momencie doszło nawet do oświadczyn. Jego nemesis jest Bowser, który cały czas stara się uprzykrzyć mu życie. Z reguły sprowadza się to do porywania księżniczki, którą Mario musi raz za razem odbijać z jego rąk